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附件2

 

新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則

 

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體檢測試劑的一般要求，注冊申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

新型冠狀病毒（2019-nCoV）（以下簡稱“新冠病毒”）屬于β屬的冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑60-140nm。具有5個必需基因，分別針對核蛋白（N）、病毒包膜（E）、基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）四種結(jié)構(gòu)蛋白及RNA依賴性的RNA聚合酶（RdRp）。核蛋白（N）包裹RNA基因組構(gòu)成核衣殼，外面圍繞著病毒包膜（E），病毒包膜包埋有基質(zhì)蛋白（M）和刺突蛋白（S）等蛋白。

新冠病毒侵入人體后，人體會產(chǎn)生相應(yīng)的特異性抗體進行防御。其中特異性抗體IgM最早產(chǎn)生并進行早期防御，但該抗體維持時間短，消失快，在血中持續(xù)數(shù)日至數(shù)周；隨后產(chǎn)生IgG抗體，在IgM接近消失時，IgG的含量達到高峰，并在血中持續(xù)較長時間。在臨床應(yīng)用中，因新冠病毒特異性IgG在病毒感染早期檢出率較低，因此該標(biāo)志物不單獨用于新冠病毒感染的輔助診斷，應(yīng)與新冠病毒特異性IgM抗體檢測聯(lián)合使用。

新冠病毒疫苗的接種會刺激人體產(chǎn)生保護性抗體，隨著大規(guī)模人群新冠病毒疫苗接種率的提高，在新冠病毒血清學(xué)檢測過程中，應(yīng)充分考慮疫苗接種對檢測結(jié)果的影響，新型冠狀病毒肺炎診療方案提出，新冠病毒特異性IgM檢測不適用于近期接種過新冠病毒疫苗的人群。同時，新冠病毒疫苗接種后抗體持續(xù)陽性的時間尚未有明確的研究結(jié)論，新冠病毒特異性IgG檢測亦不適用于接種過新冠病毒疫苗或曾經(jīng)感染過新冠病毒的人群。在新冠病毒抗體臨床應(yīng)用上，我國《新冠病毒疫苗接種技術(shù)指南》明確規(guī)定，接種后不建議常規(guī)檢測抗體作為免疫成功與否的依據(jù)。

本指導(dǎo)原則適用的新冠病毒抗體檢測試劑預(yù)期用途為體外定性檢測人體血清、血漿、全血等樣本中新冠病毒特異性IgM抗體/IgG抗體/總抗體。預(yù)期適用人群如下：新冠病毒特異性IgM抗體檢測預(yù)期適用于近期（六個月以內(nèi)）未接種過新冠病毒疫苗或未感染過新冠病毒的新型冠狀病毒感染肺炎的疑似病例；新冠病毒特異性IgM抗體/IgG抗體聯(lián)合檢測、總抗體檢測預(yù)期適用于未接種過新冠病毒疫苗及既往未感染過新冠病毒的的疑似病例。申報產(chǎn)品僅用作對新型冠狀病毒核酸檢測陰性疑似病例的補充檢測指標(biāo)或疑似病例診斷中與核酸檢測協(xié)同使用，不能作為新型冠狀病毒感染的肺炎確診和排除的依據(jù)，不適用于一般人群的篩查。本指導(dǎo)原則不適用于檢測新冠病毒IgA抗體以及中和抗體相關(guān)產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則適用于新冠病毒抗體檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導(dǎo)原則針對新冠病毒抗體檢測試劑注冊申報資料中的部分內(nèi)容進行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1. 產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）及相關(guān)法規(guī)的要求，如新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體檢測試劑盒（膠體金法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述中應(yīng)詳述檢測原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較，應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗原理、產(chǎn)品主要性能等方面詳細說明申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

（三）非臨床資料

1. 產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

1.1 產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號）的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

新型冠狀病毒IgM、IgG檢測試劑目前都發(fā)布了相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對三批產(chǎn)品進行檢驗。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

1.2 產(chǎn)品檢驗報告

新冠病毒抗體檢測試劑已有國家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對三批產(chǎn)品進行檢驗。

2. 分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。

適用的不同樣本類型應(yīng)分別進行分析性能研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的新冠病毒陽性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應(yīng)為真實樣本，如涉及稀釋后檢測，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性研究應(yīng)采用臨床真實樣本進行，通常應(yīng)當(dāng)至少包含一定數(shù)量陰性樣本、弱陽性樣本及陽性樣本，考察樣本在經(jīng)歷不同的儲存條件后，試劑能否穩(wěn)定輸出符合要求的結(jié)果。樣本穩(wěn)定性可以包含樣本凍融穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性的研究，以及樣本經(jīng)過處理后（如滅活）穩(wěn)定性的研究。

2.2適用的樣本類型

描述適用的樣本類型，如：血清、血漿或全血等，血漿和全血需考察不同抗凝劑的適用性。

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性。

如產(chǎn)品適用于全血，可采用該樣本類型進行全性能評估，亦可至少進行檢出限、不同區(qū)域病毒樣本的包容性和精密度研究，同時進行同源比對試驗。

研究樣本采集時間點的選擇：是否受病程、臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

描述校準(zhǔn)品的的量值溯源（如適用）。

描述質(zhì)控品的賦值（如適用）。需至少進行三批產(chǎn)品分別在不同適用機型的賦值研究。

2.4精密度

應(yīng)對精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。精密度研究應(yīng)采用臨床樣本。

應(yīng)考慮運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案進行評價。

設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測，具體方案可參考性能評價相關(guān)文件進行。

用于精密度評價的臨床樣本應(yīng)至少包含4個水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、（中和強）陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>

陰性樣本：待測物濃度低于檢出限或為零濃度，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

中陽性樣本：待測物濃度呈中等陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

強陽性樣本：待測物濃度呈強陽性，陽性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

2.5包容性

提供具有時間和區(qū)域特征性的不同來源的患者真實臨床樣本進行驗證。IgM抗體、IgG抗體檢測試劑分別研究各10個不同患者樣本，驗證內(nèi)容應(yīng)包括檢出限、重復(fù)性等，提供樣本及濃度的確認方法、試驗數(shù)據(jù)。其中應(yīng)注意，包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復(fù)。

2.6檢出限

檢出限的確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽性樣本梯度稀釋進行檢出限確定，每個梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，每份稀釋液重復(fù)檢測不少于20次，將具有95%陽性檢出率的抗體水平作為檢出限。

IgM抗體、IgG抗體應(yīng)分別選擇不同來源具有代表性的5個臨床樣本進行檢出限的確定。

檢出限的驗證：選擇具有時間和區(qū)域特征性的至少5個臨床樣本（與檢出限確定不同樣本）在檢出限濃度水平進行驗證，應(yīng)達到95%陽性檢出率。

采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進行稀釋?？贵w檢測試劑應(yīng)提供詳細的抗體類型和滴度的確認方法及驗證結(jié)果。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應(yīng)驗證（IgM抗體、IgG抗體檢測試劑應(yīng)分別驗證）

地方性人類冠狀病毒（HKU1，OC43，NL63和229E）。

H1N1（新型甲型H1N1流感病毒（2009）、季節(jié)性H1N1流感病毒）、H3N2、H5N1、H7N9，乙型流感Yamagata、Victoria，呼吸道合胞病毒，鼻病毒A、B、C組，腺病毒1、2、3、4、5、7、55型，腸病毒A、B、C、D組，EB病毒、麻疹病毒、人巨細胞病毒、輪狀病毒、諾如病毒、腮腺炎病毒、水痘-帶狀皰疹病毒。

肺炎支原體。

高濃度新型冠狀病毒特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗證。

驗證不少于20份正常人樣本。

提供所有用于交叉反應(yīng)驗證的病原體抗體陽性樣本的來源、和濃度/滴度確認等詳細的試驗資料。

2.7.2內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾：

不同樣本類型其潛在干擾物質(zhì)可能不同，應(yīng)根據(jù)具體采集的樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進行研究。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價，在病毒抗體臨界陽性水平進行干擾試驗驗證。

 

表 用于干擾試驗的物質(zhì)

物質(zhì)	活性成分
血液中干擾物質(zhì)	膽紅素、血脂、血紅蛋白、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、抗線粒體抗體、HAMA、總IgG、總IgM、紅細胞壓積（全血樣本適用）等。
抗病毒藥物	α-干擾素、扎那米韋、利巴韋林、奧司他韋、帕拉米韋、洛匹那韋、利托那韋 阿比多爾
抗生素	左氧氟沙星 阿奇霉素 頭孢曲松 美羅培南
全身性抗菌藥	妥布霉素
過敏性癥狀緩解藥物	鹽酸組胺

 

2.8 高劑量鉤狀效應(yīng)

申請人應(yīng)評估高劑量鉤狀效應(yīng)并提交研究資料。

2.9 IgM抗體破壞試驗（IgM抗體檢測試劑適用）：對至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進行IgM破壞試驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

2.10企業(yè)參考品性能：根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進行檢驗并提供詳細的試驗數(shù)據(jù)。

2.11反應(yīng)體系研究

2.11.1研究樣本采集時間點的選擇：是否受病程、臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

2.11.2反應(yīng)條件確定

申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、判讀時間、反應(yīng)溫度/濕度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

2.11.3反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過試驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進行研究。對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟，以降低特異性IgG可能造成的假陰性和假陽性。

應(yīng)對樣本是否可以滅活，以及可采用的滅活方式、滅活時間進行研究確定。

3. 穩(wěn)定性研究

一般應(yīng)包含研究方案，采用的樣本、儀器和試劑信息，數(shù)據(jù)（如檢驗結(jié)果、溫度記錄等）及試驗結(jié)果等。

3.1實時穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

3.2使用穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

3.3運輸穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。注意應(yīng)考察經(jīng)過運輸條件后實時穩(wěn)定性。

4. 陽性判斷值研究

陽性判斷值的確定：提交對申報試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗方案、人群樣本選擇、評價標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。確定陽性判斷值使用的樣本來源的選擇應(yīng)考慮到不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響。

如適用,可采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve, ROC）的分析方式來選擇確定合理的陽性判斷值；如結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。應(yīng)重點考察對弱陽性樣本的區(qū)分能力，研究中應(yīng)包含有統(tǒng)計學(xué)意義的弱陽性樣本例數(shù)。

如采用其他方法對陽性判斷值進行確認研究，應(yīng)說明這種方法的合理性。

陽性判斷值的驗證：應(yīng)搜集采用分布均勻的真實樣本對所確定的陽性判斷值進行驗證。

提交陽性判斷值所用樣本信息列表，至少包括性別、年齡、種族、臨床診斷信息、樣本來源機構(gòu)、抗體檢測結(jié)果等。注意，陽性判斷值的驗證樣本不應(yīng)與陽性判斷值的確定樣本以及臨床試驗樣本重復(fù)。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對所有樣本類型進行陽性判斷值的驗證。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此產(chǎn)品的主要原材料包括抗原、抗體、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗資料、供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

5.1.1新型冠狀病毒特異的抗原、抗體

病原體特異的抗原、抗體是該類產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。由于新型冠狀病毒不同地域、不同人群感染的毒株之間存在的差異尚未明確，因此在選擇抗原、抗體原料時，應(yīng)注重抗原表位的選擇，避免毒株間差異造成的假陰性，亦應(yīng)考慮抗原在其他冠狀病毒的表達情況，避免存在交叉反應(yīng)出現(xiàn)假陽性。抗原、抗體原材料研究資料中應(yīng)詳述該方面的考慮。

5.1.1.1新型冠狀病毒抗體檢測試劑所用特異性抗原

首先應(yīng)詳述抗原表位及選擇依據(jù)，此外應(yīng)提交抗原來源、制備、篩選、純化、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗等）詳細試驗資料。

主要包括以下兩種情況：

5.1.1.1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對毒株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等試驗過程予以詳述。如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息、克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化、抗原表達及純化、鑒定等詳細資料，重組抗原應(yīng)明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。

5.1.1.1.2企業(yè)外購抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱、抗原生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱、提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗報告。重組抗原應(yīng)描述關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達及純化、鑒定等資料，重組抗原應(yīng)明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。

5.1.1.2其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如小鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體、酶標(biāo)抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應(yīng)進行選擇及驗證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細胞去除方式，并驗證去除效果。

5.1.2試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線

產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個水平。抗體檢測試劑陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來源、選擇和性能確認等相關(guān)研究資料，明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對質(zhì)控品的檢測結(jié)果（如A值）做出明確的范圍要求（試驗有效性的判斷）。

5.1.3企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復(fù)性參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際需要設(shè)置企業(yè)參考品。

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認方法或試劑等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。新型冠狀病毒抗體檢測試劑的企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

5.1.3.1陽性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮覆蓋不同來源及特征的新型冠狀病毒感染樣本，可選擇至少各5份確認為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。

5.1.3.2陰性參考品

陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價，應(yīng)納入正常臨床樣本、含類風(fēng)濕因子等干擾因素的樣本及其他病原體特異性抗體、抗原陽性樣本，建議包括冠狀病毒（HKU1、OC43、NL63、229E）、流感病毒、腸道病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等抗體陽性樣本。

5.1.3.3檢出限參考品

可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢出限水平。

5.1.3.4重復(fù)性參考品

建議包括高、低兩個濃度的臨床樣本，其中一個濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

5.2.2生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并提交研究資料說明每一步驟生產(chǎn)工藝的研究確定資料。

5.2.3包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。

5.2.4顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）臨床評價資料

該類試劑應(yīng)通過臨床試驗路徑進行臨床評價。臨床試驗應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點問題。

新冠病毒抗體檢測試劑臨床試驗應(yīng)按要求在三家以上臨床試驗機構(gòu)進行，開展臨床試驗的機構(gòu)應(yīng)按要求經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)備案系統(tǒng)備案。采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品或臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進行比較研究，從而對產(chǎn)品臨床性能進行確認。

1. 臨床試驗設(shè)計

新冠病毒抗體檢測試劑臨床試驗設(shè)計與產(chǎn)品預(yù)期用途相關(guān)，該類產(chǎn)品預(yù)期用途一般為新冠病毒感染肺炎的輔助診斷，臨床試驗為觀察性研究。臨床試驗中可選擇與已上市同類產(chǎn)品進行臨床檢測結(jié)果的一致性比對，或與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進行比較研究。

如臨床試驗選擇試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進行一致性比對，在同類產(chǎn)品選擇的過程中應(yīng)注意產(chǎn)品適用樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗體外診斷試劑具有較好的可比性。

如臨床試驗選擇與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進行比較研究，則臨床試驗中應(yīng)選擇臨床上新型冠狀病毒感染的肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及疾病進程的判定結(jié)果作為對比。國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》等文件明確了新型冠狀病毒感染的肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床試驗中關(guān)于病例的確診與排除應(yīng)能夠滿足上述診療方案要求。建議同時參考診斷所用核酸檢測結(jié)果，以利于抗體檢測試劑臨床性能的充分評價。

2. 受試者選擇

臨床試驗的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，新冠病毒特異性IgM抗體檢測預(yù)期適用于近期（六個月以內(nèi)）未接種過新冠病毒疫苗或未感染過新冠病毒的新型冠狀病毒感染肺炎的疑似病例；新冠病毒特異性IgM抗體/IgG抗體聯(lián)合檢測、總抗體檢測預(yù)期適用于未接種過新冠病毒疫苗及既往未感染過新冠病毒的疑似病例。有關(guān)“疑似病例”的定義，參照現(xiàn)行有效的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》執(zhí)行。

臨床試驗的入組人群應(yīng)能夠代表產(chǎn)品適用人群的各種類型，包括新型冠狀病毒感染的肺炎確診病例、排除病例等。

其中確診病例應(yīng)包括不同疾病進程的患者（如發(fā)病初期、中期、恢復(fù)期患者等）。

3. 臨床試驗樣本要求

新型冠狀病毒抗體檢測試劑適用的樣本類型一般包括血清、血漿、靜脈全血、毛細血管全血等，試劑盒樣本采集建議按照《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術(shù)指南》進行。

對于不同的樣本類型，如臨床前研究證實檢測性能沒有差異（如血清、血漿樣本檢測性能沒有差異），則臨床試驗中可匯總統(tǒng)計,但應(yīng)注意臨床試驗應(yīng)保證每種樣本類型均有試驗體外診斷試劑檢測陽性與陰性的樣本。臨床試驗中亦可進行兩種樣本類型的同源比對。

如產(chǎn)品適用的不同樣本類型差異較大（如：血清與靜脈全血、靜脈全血與毛細血管全血），建議針對不同樣本類型進行同源比對，亦可分別按照臨床試驗設(shè)計與已上市同類產(chǎn)品或臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進行比對。

4. 臨床試驗樣本量

臨床試驗過程中建議根據(jù)產(chǎn)品性能及相關(guān)的統(tǒng)計學(xué)參數(shù)采用合理的統(tǒng)計模型對最低樣本量進行估算。其中臨床評價指標(biāo)的確定應(yīng)依據(jù)該產(chǎn)品前期研究情況。以下針對不同臨床試驗設(shè)計分別進行樣本量的建議。

4.1與已上市同類產(chǎn)品的比對研究

如臨床試驗采用試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進行比對的試驗設(shè)計，建議對比試劑檢測陽性樣本不少于200例，陰性樣本不少于300例。 

臨床試驗樣本量除需滿足上述最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；如針對確診病例應(yīng)涵蓋疾病感染的各個進程，病毒感染早期、中期病例應(yīng)分別不應(yīng)低于所有確診的25%。

4.2 與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比對研究

如臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進行比對研究。針對確診病例，試驗體外診斷試劑針對不同疾病進程的病例產(chǎn)品臨床性能存在差異，為了充分確認產(chǎn)品針對不同疾病進程病例的臨床性能，建議每一疾病階段（早期、中期和后期）病例數(shù)不少于70例。早期病例一般指發(fā)病0-7天的病例；中期病例一般指發(fā)病8-14天病例；后期病例一般指14天以后病例。針對排除病例，排除病例建議不少于300例。

4.3 不同樣本類型樣本量要求

如申報產(chǎn)品適用于不同樣本類型，臨床試驗需進行不同樣本類型的同源比對時，每種樣本類型的陽性和陰性樣本例數(shù)建議均不少于70例。

5. 臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計分析

5.1 與已上市同類產(chǎn)品比對

如臨床試驗?zāi)康臑轵炞C申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時進行假設(shè)檢驗評價兩種分析方法的一致性。

如產(chǎn)品臨床試驗采用其他統(tǒng)計學(xué)模型進行統(tǒng)計分析，如優(yōu)效性試驗等，應(yīng)充分說明其合理性。

5.2 與臨床參考方法比對

臨床試驗中針對有新型冠狀病毒感染的確診/排除結(jié)論的病例，應(yīng)以臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)為對照，以2×2表的形式統(tǒng)計試驗體外診斷試劑的總體臨床靈敏度和特異度。同時，針對不同病程階段的患者進行分層分析。臨床性能的綜合評價指標(biāo)及各亞組評價指標(biāo)均應(yīng)滿足臨床對此類檢測試劑的要求。

為評價IgG和IgM聯(lián)合檢測的臨床意義，除針對IgG和IgM檢測結(jié)果進行分別統(tǒng)計外，還應(yīng)進行兩項指標(biāo)綜合評價的統(tǒng)計分析。

臨床試驗中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸等信息進行充分的分析。

5.3 不同樣本類型的統(tǒng)計分析

臨床試驗如涉及確認不同樣本類型同源比對的臨床性能，統(tǒng)計分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種樣本類型的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時進行假設(shè)檢驗評價兩種樣本類型檢測結(jié)果的一致性。

6. 境外臨床試驗數(shù)據(jù)的認可

境外臨床試驗數(shù)據(jù)應(yīng)符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗數(shù)據(jù)的注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗方案、報告和倫理審查意見，以及該數(shù)據(jù)適用于中國患者人群的論證資料、境內(nèi)外臨床試驗質(zhì)量管理差異的對比資料和臨床試驗質(zhì)量管理差異對于臨床試驗結(jié)果影響的論證資料。

注冊申請人應(yīng)根據(jù)上述臨床試驗技術(shù)審評要求，論證境外臨床試驗數(shù)據(jù)的充分性。

7. 臨床評價資料的形式要求

申請人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交臨床評價綜述、各機構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗方案和臨床試驗小結(jié)以及臨床試驗總結(jié)報告。

臨床試驗數(shù)據(jù)匯總表作為臨床試驗小結(jié)的附件提交。數(shù)據(jù)表中應(yīng)包括檢測病例的編號、年齡、性別、樣本類型、采集時間、臨床診斷背景信息、本產(chǎn)品檢測結(jié)果、對比試劑檢測結(jié)果（如有）及新型冠狀病毒感染的確診或排除結(jié)果等，臨床應(yīng)用的數(shù)據(jù)集中每一病例編號應(yīng)能夠溯源。鑒于抗體的產(chǎn)生與病原體感染病程密切相關(guān)，建議在臨床背景信息中詳述患者發(fā)病時間、癥狀變化、疾病轉(zhuǎn)歸等，為了確認入組病例是否為產(chǎn)品預(yù)期適用人群，建議提供病例的疫苗接種情況（具體要求參見附表）。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，應(yīng)以規(guī)范格式進行標(biāo)注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。新型冠狀病毒（2019-nCoV）抗體檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容：

1.【預(yù)期用途】

產(chǎn)品預(yù)期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病防治指南，其臨床試驗入組病例應(yīng)能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。建議產(chǎn)品預(yù)期用途包括如下內(nèi)容：

針對新冠病毒特異性IgM檢測試劑，其預(yù)期用途為用于體外定性檢測近期未接種新冠病毒疫苗或未感染過新冠病毒人群的血清、血漿、靜脈全血、毛細血管全血（樣本類型根據(jù)產(chǎn)品驗證與確認情況而定）樣本中新型冠狀病毒（2019-nCoV）IgM抗體；針對新冠病毒特異性IgM抗體/IgG抗體聯(lián)合檢測、總抗體檢測，其預(yù)期用途為用于體外定性檢測未接種新冠病毒疫苗或未感染過新冠病毒人群的血清、血漿、靜脈全血、毛細血管全血（樣本類型根據(jù)產(chǎn)品驗證與確認情況而定）樣本中新型冠狀病毒（2019-nCoV）IgM抗體/IgG抗體、總抗體，如針對該預(yù)期用途產(chǎn)品為IgM抗體、IgG抗體未在一個注冊單元，建議分別在兩個產(chǎn)品中明確聯(lián)合檢測的要求。

檢測結(jié)果僅用作對新型冠狀病毒核酸檢測陰性疑似病例的補充檢測指標(biāo)或疑似病例診斷中與核酸檢測協(xié)同使用，不能作為新型冠狀病毒感染的肺炎確診和排除的依據(jù)，不適用于一般人群的篩查。

檢測結(jié)果為陽性還需進一步確認，檢測結(jié)果陰性不能排除感染的可能性。

本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實驗室檢測對病情進行綜合分析。

開展新型冠狀病毒實驗室檢測，應(yīng)符合《新冠病毒樣本采集和檢測技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。

該產(chǎn)品僅限醫(yī)療機構(gòu)使用。

2.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：

2.1樣本采集：明確采集時間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

2.2干擾物的影響：明確常見干擾物對實驗結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

2.4應(yīng)包括樣本應(yīng)采用的滅活方式，采用該方式的依據(jù)，以及滅活需要的時間等。

3.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟：

3.1實驗環(huán)境：實驗室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

3.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序等。特別注意應(yīng)強調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時間。

3.7特別說明檢驗操作過程中的注意事項。

4.【陽性判斷值】建議將陽性判斷值確定與驗證的方法，采用的樣本及例數(shù)總結(jié)至該項下。

5.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控線/對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品以及樣本的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進行詳述。對于膠體金法檢測試劑可采用圖示形式顯示檢測結(jié)果。檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項下引用，相應(yīng)檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細說明灰區(qū)樣本的處理方法。

6.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關(guān)說明，建議包括以下內(nèi)容：

6.1本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢測（尤其是病原學(xué)檢測）、治療反應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運、處理及不當(dāng)?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

6.3根據(jù)機體被病毒感染后產(chǎn)生抗體的基礎(chǔ)理論，特異性IgM抗體產(chǎn)生較早，持續(xù)時間較短；IgG抗體產(chǎn)生較晚，持續(xù)時間較IgM抗體長。另外，由于病毒感染到機體產(chǎn)生特異性抗體需經(jīng)一定時間、抗體的強度存在個體差異，與感染抗原的量及抗原的抗原性強度相關(guān)。所以應(yīng)將IgM抗體檢測結(jié)果、IgG抗體檢測結(jié)果、采樣時間、臨床指征及出現(xiàn)時間等綜合考慮。抗體檢測陽性者也應(yīng)結(jié)合其他臨床指征綜合判斷。

6.4感染初期，抗體可能未產(chǎn)生或者產(chǎn)生水平低于產(chǎn)品檢出限，而產(chǎn)生陰性結(jié)果。檢測陰性不能排除急性感染，對于可疑的樣本建議進行病原學(xué)檢測，或至少間隔7天再次檢測。

6.5評價血清學(xué)檢測結(jié)果時需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷或免疫功能受抑制的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測的參考價值有限，可能會導(dǎo)致錯誤的醫(yī)學(xué)解釋。

6.6新冠病毒特異性IgG檢測不適用于曾經(jīng)感染過新冠病毒的人群。

6.7注射過新冠病毒疫苗的人群，其抗體水平可能為陽性，其IgM、IgG抗體檢測的參考價值有限，可能會導(dǎo)致錯誤的醫(yī)學(xué)解釋。

6.8新冠病毒抗體檢測的結(jié)果不能用于評估人體是否已經(jīng)對新冠病毒肺炎具備免疫力,特別是不能用于評估新冠病毒疫苗的作用和功效。

6.9在近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

6.10該產(chǎn)品為定性分析產(chǎn)品，結(jié)果并不能準(zhǔn)確反映新型冠狀病毒（2019-nCoV）IgM/IgG抗體的滴度。

6.11其他需要說明的局限性等。

7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

簡述以下性能指標(biāo)：

7.1國家標(biāo)準(zhǔn)品和企業(yè)參考品符合率。

7.2檢出限：簡要介紹評價方法、所用樣本情況以及評價結(jié)果。

7.3對包容性的研究情況進行總結(jié)。

7.4對精密度的研究情況進行總結(jié)。

7.5分析特異性

7.5.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

7.5.2干擾試驗：說明驗證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

7.6臨床試驗：簡要介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結(jié)果和結(jié)論等。

8.【注意事項】

8.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

8.2明確本試劑盒所采用的生物學(xué)來源的組分，雖經(jīng)滅活，但不能保證其不具有潛在傳染性，需要嚴格按照生物安全有關(guān)規(guī)定操作，遵循實驗室操作的常規(guī)規(guī)定。所有樣品、洗滌液（如適用）和各種廢棄物均應(yīng)按污染物處理。

8.3試劑操作的注意事項，如是否需要平衡至室溫再使用，是否需要搖勻等。不同批號的試劑是否可以混用。

8.4有關(guān)實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻

1.《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）[Z].

2.《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）[Z].

3. 中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會. 新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第九版) [Z]. 2022-03-15.

4. 中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會.新型冠狀病毒肺炎防控方案（第八版）[Z].2021-05-14.

5. 中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會疾病預(yù)防控制局. 新冠病毒疫苗接種技術(shù)指南（第一版）[Z].2021-03-29.

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